【支原体专题】支原体快速检测为生物制药放行“加速度”

在细胞培养和生物制药领域，支原体污染一直是一个令人头疼且不容忽视的严重问题。支原体作为一类无细胞壁的原核微生物，广泛存在于生活环境中，常寄生在人类表面，已知有超过190种分布在人类、动物、昆虫和植物中，其大小及外形多变，并且部分支原体对动物具有致病性。在细胞实验中，支原体是常见污染源，约15%-35%的细胞培养物可能受其污染，不同实验室中10%-85%的细胞可能受其影响，其主要污染来源是环境和实验室操作人员。

在众多的细胞治疗研究中，如《Safety and potential efficacy of expanded mesenchymal stromal cells of bone marrow and umbilical cord origins in patients with chronic spinal cord injuries: a phase I/II study》均涉及到细胞的培养和应用。同时，研究人员对用于治疗慢性脊髓损伤的间充质干细胞进行了多项质量控制检测，其中包括支原体检测，以确保细胞的安全性和有效性。这些研究强调了细胞质量控制的重要性，其中支原体检测是关键环节。在CAR - T细胞疗法的研究中，如《Synthetic biology approaches for enhancing safety and specificity of CAR - T cell therapies for solid cancers》中提到，支原体污染可能影响 CAR - T 细胞的功能和安全性，进而影响治疗效果，甚至威胁病患安全。用于治疗用途的细胞产品，绝不容许有支原体污染情况出现。

支原体污染对细胞和生物制品的危害显著。对细胞而言，支原体可导致染色体异常、破坏核酸合成、影响代谢、改变细胞膜特性，甚至诱发细胞凋亡。对于生物制药生产，支原体污染会导致细胞产量减少、影响产品质量，且一旦发生污染，需销毁受污染批次的产品，并花费大量时间和费用调查污染源、清洁设备，造成严重的经济损失。因此，在生物制药的各个阶段，对原材料、细胞培养过程以及最终产品进行严格的支原体检测至关重要。

随着细胞治疗应用的兴起，支原体检测成为确保细胞制品质量和安全的必要质量控制过程。传统的支原体检测方法主要包括培养基培养法、指示细胞培养法和聚合酶链式反应（PCR）测试法。培养基培养法耗时较长，最多需要28天，且灵敏度易受多种因素影响；指示细胞培养法也存在一定的局限性。对于需要快速放行产品的生物制药行业来说，这些传统方法是一个巨大的挑战。

如今，基于核酸扩增的快速检测技术为这一问题提供了解决方案。实时荧光定量PCR技术（qPCR）等方法能够在短时间内准确检测出支原体的存在，大大缩短了检测时间，提高了工作效率。qPCR检测法是一种快速、可靠的替代方法，具有高灵敏度、特异性、可靠性，操作速度快且成本相对较低，适合实验室操作。然而，qPCR无法区分活的和死的支原体，实验条件需优化，需要搭配合适的对照以避免假阳性和假阴性结果。

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