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Enzyme für die detaillierte Charakterisierung von Antikörpern

Therapeutische Antikörper, die als Biopharmazeutika verwendet werden, sind hochkomplexe Moleküle, die eine strenge Überwachung und Kontrolle während der Herstellung erfordern. Da es sich um ein biologisches Arzneimittel handelt, geben die Arzneimittelsicherheit und die inhärenten Schwankungen bei den Produktionsmethoden immer Anlass für Bedenken. Daher sollte eine Reihe von Arbeitsabläufen für eine umfassende, detaillierte analytische Charakterisierung angewendet werden, um die Produktqualität zu analysieren und zu charakterisieren.
Aufgrund der jährlich drastischen Zunahme an Zulassungen von monoklonalen Antikörperprodukten wie mAbs, Fc-Fusionen, Fabs, Antikörper-Wirkstoff-Konjugaten, bispezifischen mAbs (bsAbs) und bispezifischen T-Zell-Engagern (BiTE), kann das Verständnis der einzelnen posttranslationalen Modifikationen (PTMs) einen besseren Einblick in die In-vivo-Wirksamkeit , die Pharmakokinetik und den Wirkmechanismus der hergestellten Abs geben und eine Vorhersage ermöglichen.
Die Charakterisierung von Abs erfolgt in der Regel aus mehreren Blickwinkeln, angefangen von der Top-down-Analyse (Gesamtstruktur) über die Bottom-up-Analyse (Peptidsequenzierung) bis hin zur Analyse auf mittlerer Ebene (Fc, Fv, PTMs).
Um Methoden zur Charakterisierung von Antikörpern zu fördern, hat ACROBiosystems eine Reihe von Enzymen entwickelt, die bei der Charakterisierung von Antikörpern und den damit verbundenen PTMs mitwirken.

Produktliste

Product Details Cat. No. Unit Definition
Endo H (500U/μl) ENH-S5116 One unit is defined as the amount of enzyme required to remove >95% of the carbohydrate from 10µg of denatured RNase B in 1 hour at 37°C in a total reaction volume of 10µl.
Endo S (200U/μl) ENS-S5143 One unit deglycosylates ≥ 95% of 1 μg human IgG, when incubated in 10 mM sodium phosphate, 150 mM NaCl, pH7.4 at 37°C for 30 min.
SpeB (40U/μl) SPB-S5115 One unit digests ≥ 95% of 1 µg human IgG1 when incubated in PBS ith 5 mM DTT or TCEP, pH 7.4 at 37°C for 1 hour.
IdeS (20U/μl) IDS-S5143 One unit digests ≥ 95% of 1 μg human IgG when incubated in 10 mM sodium phosphate, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, pH7.4 at 7°C for 30min.
Werkzeuge für die Glykananalyse

Werkzeuge für die Glykananalyse

Die Struktur und Art der N-gebundenen Glykane kann die Immunogenität, Pharmakokinetik und Pharmakodynamik therapeutischer Proteine wie monoklonaler Antikörper (mAbs) und Fc-Fusionsproteine beeinflussen. Enzyme wie Endo H und Endo S ermöglichen typspezifische Spaltungen von N-verknüpften Glykanen für die anschließende Analyse.

Endo H (500U/μl) (Kat. Nr. ENH-S5116)

Anwendung:

Endo H spaltet Asparagin-verknüpfte (N-verknüpfte) hybride oder mannosereiche Oligosaccharide, nicht aber komplexe Oligosaccharide.
Spaltung von mannosereichen oder hybriden N-Glykanen

Endo H (500U/μl) (Kat. Nr. ENH-S5116)

Produktmerkmale:

Selektive Wirkung: Spaltet keine komplexen Glykane
≥95% Reinheit, bestimmt durch SDS-PAGE
Optimaler pH-Wert: 5-6
Reaktionszeit: 1 h

Endo S (200U/μl) (Kat. Nr. ENS-S5143)

Anwendung:

Endo S spaltet bevorzugt komplexe Oligosaccharide und vermeidet die Spaltung von Asparagin-verknüpften (N-verknüpften) hybriden oder mannosereichen Oligosacchariden.
Spaltet komplexe Glykane, begrenzte Aktivität bei Glykanen mit hohem Mannosegehalt und vom Hybridtyp.

Endo S (200U/μl) (Kat. Nr. ENS-S5143)

Produktmerkmale:

Hocheffiziente IgG-spezifische Endoglycosidase
≥95% Reinheit bestimmt durch SDS-PAGE
Reaktionszeit: 30 min

Fragmentierung von Antikörper-Untereinheiten

SpeB (40U/μl) (Cat. No. SPB-S5115)

Anwendung:

Das SpeB-Enzym baut IgG ab und erzeugt Fab- und Fc-Fragmente. Gereinigte und homogene Fab-Fragmente können in vielen Anwendung en eingesetzt werden, unter anderem:
Untersuchung der monovalenten Bindung von Fab-Fragmenten an das Antigen.
Beseitigung der Fc-vermittelten Effektor-Funktionen.
Geringere unspezifische Bindung durch Fc-Wechselwirkungen.

SpeB (40U/μl) (Cat. No. SPB-S5115)

Produktmerkmale:

Spaltstelle (Human IgG1): KTHT / CPPCPAP (oberhalb der Scharnierregion)
Reaktionszeit: 60 min

IdeS (20U/μl) (Cat. No. IDS-S5143)

Anwendung:

Die IdeS-Protease spaltet spezifisch IgGs unterhalb der Scharnierregion in F(ab')2- und Fc-Fragmente.

IdeS (20U/μl) (Cat. No. IDS-S5143)

Produktmerkmale:

Spaltstelle (Human IgG1): CPAPELLG / GPSVF (unterhalb des Scharniers)
Reaktionszeit: 30 min

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