Claudin18.2-VLP,CAR阳性率检测应用案例
在CAR-T细胞治疗领域的研究中,实体瘤相关的治疗方法开发一直是亟待突破的方向。Claudin18.2在实体瘤上的靶点优势使得研究人员在CAR-T细胞免疫治疗研究领域对其进行了广泛的布局。例如, 2021年11月15日,细胞治疗企业科济药业发布公告,其开发的全球首款Claudin18.2 CAR-T候选产品CT041已被欧洲药品管理局(EMA)授予优先药物(PRIME)资格,用于治疗胃癌/胃食管结合部癌。值得一提的是,这也是全球首个入选PRIME计划的实体瘤CAR-T产品。
2022年5月9日,《Nature-Medicine》期刊发表的CT041治疗胃肠道癌症的I期临床试验数据(NCT03874897)结果显示:所有37例晚期消化道肿瘤患者的客观缓解率(ORR)和疾病控制率(DCR)分别为48.6%(95%CI,31.9,65.6)和73.0%(95%CI,55.9,86.2),安全性方面副反应整体可控,耐受性良好。此次临床数据展现了Claudin 18.2 CAR-T细胞疗法攻克实体瘤的突破性进展。
靶向Claudin18.2 CAR-T领域临床研究
研究领域 | 临床阶段 | 临床试验代码 | 研发代码 | 适应症 | 企业 |
---|---|---|---|---|---|
CAR-T | Phase 1/2 | NCT04581473 | CT041 | 胃腺癌,胰腺癌,胃食管交界处腺癌 | 科济生物 |
Phase 1 | NCT04404595 | 胃癌,胰腺癌 | |||
Phase 1 | NCT03874897 | CAR-CLDN18.2 T-Cells | 晚期实体瘤 | ||
Phase 1 | NCT03198052 | 肺癌 | 昭泰医疗 | ||
Phase 1 | NCT04467853 | LCAR-C18S cells | 胃癌 | 南京传奇 | |
Phase 1 | NCT04966143 | LY011 | 胰腺癌 | 隆耀生物 | |
Phase 1 | NCT04977193 | 晚期胃腺癌 | |||
Phase 1 | NCT04842812 | TILs and CAR-TILs targeting Claudin18.2 | 肝癌,肺癌,乳腺癌,结直肠癌,脑瘤,实体瘤 | 广州医科大学附属第二医院 | |
Phase 1 | NCT05199519 | IBI345 | Claudin18.2阳性实体瘤 | 信达生物 |
数据来源:药渡,clinicaltrials.gov,截止2022/1/20
专为Claudin18.2 CAR检测设计的Claudin18.2-VLP(Cat. No. CL2-HF218)
ACROBiosystems专门搭建了基于HEK293表达系统的VLP技术平台,通过包膜VLP技术,将聚集在细胞膜表面的构象完整的全长四次跨膜蛋白Claudin18.2,组装在类病毒颗粒表面,从而获得可溶性的、高浓度的、正确折叠的完整Claudin18.2,Claudin18.2-VLP(Cat. No. CL2-HF218)是一款专为CAR检测设计的产品,在C端带有一个GFP标签,推荐用于CAR阳性率检测。
Claudin18.2-VLP(Cat. No. CL2-HF218)为CAR检测“出彩”【应用案例】
检测方法:流式细胞术
检测仪器:BD FACS Celesta流式细胞分析仪 (BD Biosciences)
样本信息:Anti-Claudin18.2 CAR-293细胞
主要试剂:
- - GFP标签的Claudin18.2-VLP蛋白(Fluorescent Human Claudin18.2 Full Length Protein-VLP (HEK293) ACROBiosystems, Cat. No. CL2-HF218)
- - VLP蛋白(Fluorescent Virus-Like Particle (VLP) isotype control, ACROBiosystems, Cat. No. VLP-NF2P4)
简要流程:
- 1. 用含10% FBS的DMEM培养基在37℃,5% CO2培养箱中培养Anti-Claudin18.2 scFv-过表达293细胞。
- 2. 收集细胞,用FACS缓冲液清洗细胞一次。
- 3. 进行细胞计数及存活率测定,等分细胞悬液,每管 2×105 活细胞。
- 4. 用FACS缓冲液将Human Claudin18.2蛋白(Cat. No. CL2-HF218)稀释成3 μg/mL浓度后,取100 μL稀释后的样品溶液加入细胞悬液管中。混合均匀,4℃孵育60分钟。
- 5. 用FACS缓冲液洗涤细胞3次,并用200 μL PBS重悬细胞。
- 6. 转移细胞至流式管进行流式细胞分析。
检测结果:
- 经FACS验证, Claudin18.2-VLP 蛋白(Cat. No. CL2-HF218)可与Claudin18.2-CAR-293细胞特异性结合,不与未转染Claudin18.2-CAR的PBMCs特异性结合。
用阴性对照蛋白(Cat. No. VLP-NF2P4)和Human Claudin18.2-VLP 蛋白(Cat. No. CL2-HF218)分别结合转染Claudin18.2-CAR-293细胞,结果表明,Claudin18.2-VLP 蛋白(Cat. No. CL2-HF218)可与Claudin18.2-CAR-293细胞特异性结合。
用阴性对照蛋白(Cat. No. VLP-NF2P4)和Human Claudin18.2-VLP 蛋白(Cat. No. CL2-HF218)分别与未转染Claudin18.2-CAR的PBMCs结合,结果表明,无非特异性结合信号。
Protocol
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