【技术分享】如何减少DNA气溶胶污染？

发布日期：2023-06-05

浏览量：36

DNA气溶胶是什么？

根据维基百科的解释,DNA气溶胶是“A liquid droplet carrying any free submicroscopic practice is known as aerosol”，这些微滴往往在实验过程中产生，并一直留在实验室操作环境的周围或附近的空气中。所以，DNA气溶胶是携带未知DNA片段的液滴，特别是这种液滴非常小，以至于它们可以漂浮在大气中。

由于DNA气溶胶中存在外源性DNA，这些外源性DNA可能会引起非特异性扩增，最终导致假阳性结果的出现，影响PCR实验结果的判读。

DNA气溶胶是如何产生？

DNA是一种微小的生物分子，在显微镜下都看不到。与此同时，DNA分子比较脆弱，容易片段化。这两种特性使其更容易成为气溶胶。DNA气溶胶产生的原因：

1. 将使用过的枪头，EP管和手套留在生物安全柜中；

2. 在同一区域频繁进行DNA相关的实验；

3. 不规范的移液器操作。

比如，实验人员在稀释高浓度DNA样本的时候极容易会产生DNA气溶胶，生物安全柜的气流使其在周围大气中扩散，并且混匀过程中无缘无故地不断按压移液器会加重气溶胶的产生。

如何防止DNA气溶胶污染？

为了减少核酸提取，PCR和任何其他基因实验过程中，极易出现的DNA气溶胶污染，ACROBiosystems的分子研发平台遵循基因实验室设置和核酸工作的国际标准，整理出一套完善的工作SOP，以期帮助我们的实验人员减少在工作流程中存在的DNA气溶胶问题。

核酸提取、稀释和qPCR实验室核酸清除SOP

一、实验空间建议：

为控制在提取、稀释、以及qPCR过程中发生核酸或产物气溶胶污染对实验结果造成影响，建议PCR实验室分间设置【试剂准备间（无核酸）、样本提取间、扩增间；或至少分阴性间（试剂准备）、阳性间（样本提取+扩增）】，以及适当的气流、压差控制。

二、实验室核酸污染整体清洁：

1. 实验室整体核酸清除：

使用核酸清除剂对各个实验操作区域进行清洁，喷洒范围：生物安全柜工作区（包括安全柜操作台面、前壁、左右侧壁；若操作台面可掀起，请掀起操作台面对下方底面、背面同时进行彻底消杀）、桌面、移液器、离心管架、磁力架、冰箱门把手、实验室空间等，喷完核酸清除剂后反应10~15min；最后需用无尘纸和70%酒精对核酸清除剂喷洒过的区域进行清洁；

2. 移液器清洁：

用70%酒精对移液器进行整体喷淋，特别是移液器与枪头连接处位置，对该位置进行喷淋冲洗，最后用无尘纸吸干酒精并风干防残留；

3. 离心管架清洁：

用70%酒精喷淋，再用纯化水浸泡至少20min，冲洗干净，晾干；

4. 地面清洁：

用纯化水或自来水清洗拖布，对实验室地面进行清洁，清洁后立即清洗拖布；也可用10%次氯酸钠消毒水喷洒地面，然后再用自来水清洗拖布清洁次氯酸钠；

5. 紫外消杀：

清洁完成后对实验室进行整体紫外照射消毒，约15~30min，每周进行1次；紫外照射完成后打开风机排风10~30min；

6. 实验垃圾清理：

实验垃圾须及时处理，扎紧垃圾袋放到特定垃圾处理间统一处理（非HCD检测实验室）。

7. 定期核酸污染监测：

建议对检测流程的每个实验区和生物安全柜中至少每月进行1次环境核酸污染监测（根据各自实验室使用和检测频次高的目的核酸进行qPCR），即用八联排PCR管直接加入10µL ddH2O开盖放置1-2小时，然后加入对应PCRmix，进行qPCR检测。